峰型問題是液相的主要問題，在做液相過程中，我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰型，對于各種各樣的異常峰：未出峰、幾個峰是負峰、出現雙峰或肩峰、前伸峰、拖尾峰、平頭峰、鬼峰等，要區別對待，從主要問題出發，一個一個加以解決。
今天，小編主要針對其中的雙峰情況和大家做下交流。色譜雙峰指的是明明是同一種物質，但在色譜圖中卻呈現出雙峰，讓人誤認為是含有二種物質。
在HPLC分析中，色譜柱正常，樣品靈敏度足夠，分析方法合適，色譜峰在出峰時間較短的條件下（不包括梯度），峰型應對稱而尖銳。但是，在對樣品了解程度不夠，方法不妥，樣品處理方法及進樣方式不合理時，會出現各種意想不到的問題，而對色譜峰難以作出合理的解釋，尤其對于新手更是如此。比如說色譜雙峰的問題，這種情況大致可分為四種原因：
1 .色譜柱
如果你分析樣品時發現每個色譜峰都雙峰出現（出峰越快，雙峰的可能性會減少），尤其采用單一純物質時，可以肯定色譜柱出問題－保護柱污染或柱頭固定相變臟或流失，或顆粒聚集在色譜柱的入口篩板上。如果進樣量少，原來色譜柱正常，色譜峰的形狀多為一大峰帶一小峰，不一定拖尾，這一般應是柱頭受堵，將色譜柱反過來接，用流動相沖洗或酸洗或其它溶劑，將堵在柱頭的殘留物沖掉，再反過來，一般情況下就行了。當然不反沖，正沖有時也會正常的。
如果峰拖尾，雙峰強弱相差不大，柱頭固定相變臟或流失可能性更大，這是可以將進樣那頭擰開，將微孔濾片超聲，柱頭刮去一部分填料，重新填上新填料擰緊，不過這種活，需要一定技術，同時不能老干那種事，否則用不了幾次，色譜柱就會應柱效很低而報廢。
2 .溶劑極性及進樣量
許多HPLC分析者對此可能不以為然，一般的hplc的書籍和文獻都不會提到這方面的內容，而這確是雙峰產生的一個很重要的原因。目前hplc分析多為反相色譜，流動相多為甲醇、乙腈、水，加各種添加劑以改善分離性能。樣品一般用與流動相相溶的溶劑溶解。最佳的溶解方法是用流動相溶解，但是很多情況是不一致的。當用溶劑極性強度大的試劑，如純甲醇、純乙腈，純乙醇，而分析體系中以水為主，樣品進樣量大，如定量管為20ul，此條件下完全可以肯定，單一的純物質出雙峰，第二峰比第一峰小（每次都不太一樣），且拖尾，保留時間會提前(相對進樣量少而言)，將進樣量減少一半以上，峰型將變為正常。這是樣品的溶劑與流動相極性相差太大，而流動相來不及將其稀釋達到平衡造成的。這是上面提到進樣量造成雙峰的一個原因，另一個原因是，進樣量不一定大，但絕對量很大，色譜圖上的雙峰緊靠在一起，基本上齊高，不拖尾（如果出峰很快，也可能是色譜柱問題）。將樣品稀釋再進樣就可以了，這是由于進樣量過大，色譜柱過載造成的。
如果樣品溶劑與流動相不溶或互溶性不好，當樣品注入色譜分離體系中，會析出并接著再溶解的可能，這時相當于二次進樣，也非常容易產生雙峰。
3 .樣品的特性及pH值
有些樣品由于其化學結構的特點，存在互變異構現象，而這種互變異構體無法分開，而是以一個動態平衡存在。在色譜分析時，在一個特定的條件下，一種物質將出現雙峰，甚至三峰.這時一般雙峰靠的很近，基本齊高，不拖尾，條件稍一變化，尤其pH，雙峰現象將消失，如紅霉素等。有的樣品紫外的色譜圖上看不到雙峰，但在LC-MS下，用質譜檢測器，其質譜的總離子流圖上較明顯.
pH對峰形的影響在緩沖液流動相平衡過程中非常明顯，當連續進樣時，受pH的連續變化影響會經常遇到這種雙峰的情況。另外，在樣品分析時，流動相的pH盡量遠離被分析物的等電點，否則也容易引起雙峰的產生。在用離子對試劑分析時，選擇不好條件也會容易引起雙峰的產生。
4 .儀器參數
記錄的參數一般都內定的，不必修改，但GC和HPLC的參數是不完全一致的，例如C－R3A數據記錄儀上的一般記錄時間間隔GC為2ms，HPLC 為5ms，如果記錄間隔時間縮短，一個峰將變為二個峰或更多。
還有一種情況是，參比波長設置錯誤，例如設置分析波長254nm，參比波長400nm，這個對于大多數化合物可能沒影響。但是如果被測化合物，在400nm處也有強的紫外吸收，比254nm更高。這樣其出峰時，由于背景的抵扣作用，本來一個峰會變成對稱的二個峰，而且如果將二峰之間的峰谷反轉180度，恰好是一個完整的峰。這時要將參比波長設置更大，或者取消。
HPLC （高效液相色譜法）技術發展至今，其應用范圍已經涉及到多個領域：
1.環境分析中的應用：可應用于環芳烴、農藥 殘留分析等。
2.食品分析中的應用：可應用于食品營養成分分析、食品添加劑分析、食品污染物分析等。
3.生命科學中的應用：可在分子水平上研究生命科學、遺傳工程、臨床化學、分子生物學及生化領域的分子量物質純化、分離和測定等。
4.醫學檢驗中的應用：體液中代謝物測定、藥代動力學研究、臨床藥物監測等的分析測定。
5.無機分析中的應用：陰、陽離子的分析等。
其最大的特點是可以分離不可揮發或受熱后不穩定的有機物。且HPLC法色譜柱可以反復使用，分離效率高，分析速度快，靈敏度高，操作自動化，適用范圍廣( 樣品不需氣化，只需制成溶液即可)，定量分析方法的準確度高的特點，在《中國藥典》中該法已成為中藥制劑含量測定最常用的分析方法。它與氣相色譜法配合使用，幾乎可以承擔絕大部分的有機物分離測試任務。
HPLC法應用如此廣泛，幾乎是每個實驗室的必備基礎分析儀器，實驗分析員們最多操作的也是高相液相色譜儀，所以遇到問題可能也是最多的，那么，只要多多動手，多多思考，多多總結，日積月累，對于HPLC法你會變得更加游刃有余！
